2、嗜酸性粒细胞促进肝脏IR损伤后的组织修复

      研究者将WT小鼠骨髓来源的嗜酸性粒细胞（bmEos）过继转移至IR损伤后的嗜酸性粒细胞缺陷小鼠（ΔdblGATA1小鼠）（图2I）。通过HE染色、免疫组化和WB进行对比，结果显示在注射生理盐水的对照组ΔdblGATA1小鼠中，IR手术后第7天HE染色显示仍有大面积坏死，第3天肝细胞增殖受到抑制。但在接受WT-bmEos的ΔdblGATA1小鼠中，第7天肝脏组织学恢复到接近正常水平（图2J-L）。此外，在注射了WT-bmEos的ΔdblGATA1小鼠中，肝细胞增殖也得到恢复（图2M-P）。这表明嗜酸性粒细胞在肝脏IR损伤后的组织修复中发挥重要作用。

     为了探究嗜酸性粒细胞如何促进IR损伤后的肝脏修复，对过继转移WT-bmEos的Δ dblGATA1小鼠进行了细胞因子阵列分析。数据显示IL-4和IL-13是WT-bmEos过继转移至ΔdblGATA1小鼠时最显著上调的细胞因子。为了进一步研究IL-4和IL-13的细胞来源，使用IL-4/GFP（4Get）小鼠进行流式细胞术分析测量IL-4和IL-13的表达。结果显示IL-4和IL-13主要由组织修复过程中的嗜酸性粒细胞产生。这些数据表明，嗜酸性粒细胞产生的IL-4和/或IL-13在IR损伤后的肝脏修复和再生中起关键作用。

3、嗜酸性粒细胞通过产生IL-4促进肝组织修复

     为了进一步明确嗜酸性粒细胞缺陷小鼠肝脏修复延迟是否与缺乏IL-4或IL-13有关，给IR损伤后的ΔdblGATA1小鼠分别注射IL-4c或IL-13c。结果显示，注射IL-4c可以显著增加肝细胞增殖（图3J-K）并加速肝脏修复（图3G-I）。相反，注射IL-13c的ΔdblGATA1小鼠的肝脏修复能力没有任何改善（图3G-K）。在IR损伤后第1天将从IL-4^-/-小鼠（IL4缺失）获得的bmEos过继转移到ΔdblGATA1小鼠中（图3A），IL-4缺失的bmEos虽然表达IL-13，但不能恢复ΔdblGATA1小鼠的肝脏修复功能（图3Q-S）。综上结果表明嗜酸性粒细胞产生的IL-4，而不是IL-13，在IR损伤后的肝脏再生修复中起着关键作用。

4. IL-4作用于肝巨噬细胞的IL-4R α促进肝脏再生修复

     将WT，CFTR-KO或CFTR-KO-GC小鼠的粪便微生物群分别移植到无菌（G

研究者筛选了NPCs中IL-4Rα的表达，数据显示70%以上的IL-4R α阳性细胞是巨噬细胞。为了进一步验证IL-4是否通过巨噬细胞中的IL-4Rα信号传导促进肝脏修复再生，对特异性巨噬细胞IL-4Rα缺失小鼠 （Il-4rα^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠）进行肝脏IR损伤处理，结果显示与对照组小鼠相比，Il-4rα^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠的肝再生修复显著延迟，肝脏坏死面积更大，增殖的肝细胞数量更少。用IL-4c治疗后，Il-4rα^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠肝脏修复功能并没有恢复正常（图4H-L）。这些结果表明IR损伤后嗜酸性粒细胞产生的IL-4通过肝巨噬细胞的IL-4Rα促进肝脏再生修复。

5. IL-4诱导肝巨噬细胞产生HB-EGF促进肝脏再生修复

      进一步研究肝巨噬细胞中IL-4/IL-4Rα信号如何促进IR损伤后的组织修复和再生，研究者使用IR损伤后第3天的小鼠肝脏样本进行了反向蛋白阵列（RPPA）分析和蛋白质印迹验证。结果显示与对照组相比，Il-4rα^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠肝脏中磷酸化（p）-表皮生长因子受体（p-EGFR）水平降低，表明肝巨噬细胞中的IL-4/IL-4Rα信号可以调节一种或多种EGFR配体。在IR损伤后第3天从Il-4rα^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠和对照小鼠中纯化出肝巨噬细胞，并检测细胞中7种已知EGFR配体的mRNA水平（EGF、TGFα、Hb-EGF、双调蛋白（Amphiregulin）、表皮调节素（Epiregulin）、β细胞素（Betacellulin ）、EPG（Epigen））。结果显示，在Il-4rα^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠的肝巨噬细胞中，只有Hb-EGF的表达减少（图5C）。为了证明HB-EGF在IR损伤后肝脏修复中的作用，研究者在IR损伤后第1天和第3天将重组小鼠HB-EGF注射到Il-4rα^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠中。加入外源性HB-EGF后在IR损伤后第7天肝脏恢复正常（图5F-H）。结果表明HB-EGF在IR损伤后促进肝脏再生修复。  为了进一步验证IL-4的促修复功能依赖于肝巨噬细胞来源的HB-EGF，对特异性肝巨噬细胞HB-EGF缺失的小鼠（Hb-egf^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠）IR损伤后注射IL-4c治疗。治疗后Hb-egf^fl/flClec4f-Cre^+/-小鼠不能恢复肝脏修复功能（图6B-D）。这表明嗜酸性粒细胞产生的IL-4刺激巨噬细胞产生HB-EGF，进而促进肝再生修复，这一过程在IR损伤后的肝再生修复中具有关键作用。